紫外分光光度計測定葡萄糖的操作講解
發(fā)布日期:2017-05-15 瀏覽次數:8205
紫外分光光度計利用一定頻率的紫外可見(jiàn)光照射被分析的有機物質(zhì),引起分子中價(jià)電子的躍遷,它將有選擇地被吸收。一組吸收隨波長(cháng)而變化的光譜,反映了試樣的特征。在紫外可見(jiàn)光的范圍內,對于一個(gè)特定的波長(cháng),吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度,因此測量光譜可以進(jìn)行定性分析,而且根據吸收與已知濃度的標樣的比較,還能進(jìn)行定量分析。
葡萄糖是自然界分布廣且為重要的一種單糖,它是一種多羥基醛。水溶液旋光向右,故亦稱(chēng)“右旋糖”。葡萄糖在生物學(xué)領(lǐng)域具有重要地位,是活細胞的能量來(lái)源和新陳代謝中間產(chǎn)物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。在糖果制造業(yè)和醫藥領(lǐng)域有著(zhù)廣泛應用。
紫外分光光度計如何快速測定葡萄糖呢?
一、材料、試劑:葡萄糖、糊精;葡萄糖氧化酶;草酸鈦鉀;麥芽糖;可溶性淀粉;0.9%氯化鈉注射液;所用試劑均為分析純;試驗所用水為二次蒸餾水。
二、儀器與設備:紫外分光光度計;電子分析天平。
三、試驗方法:
1、草酸鈦鉀溶液(0.0354 g/mL)的配制準確稱(chēng)取0.0354 g草酸鈦鉀分析純置于1000μL的生理鹽水中,充分溶解,備用。
2、葡萄糖標準溶液(0.1 g/mL)的配制準確稱(chēng)取0.1 g葡萄糖樣品置于1000μL的生理鹽水中,充分溶解,備用。
3、葡萄糖氧化酶標準溶液(100 U/250μL)的配制在裝有100 U/10μL葡萄糖氧化酶的離心管中,加入240μL的生理鹽水,混合均勻,備用。
4、樣品中葡萄糖的測定測試時(shí),首先分別移取150μL葡萄糖氧化酶、75μL草酸鈦鉀、175μL緩沖溶液至2.5 mL的石英比色皿中,再移取100μL檢測試樣至比色皿中,立即置于紫外分光光度計中,測量其在波長(cháng)382 nm的吸光值,通過(guò)吸光值與葡萄糖質(zhì)量濃度間的響應關(guān)系得知樣品中葡萄糖的含量。
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