紫外分光光度計的原理： 物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(cháng)的光能量，相應地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據物質(zhì)的吸 收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
紫外分光光度法的定量分析基礎是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比，其數學(xué)表示式如下：
A=錬c
式中：A—吸光度(又稱(chēng)光密度、消光值)，
å—摩爾吸光系數(其物理意義為：當吸光物質(zhì)濃度為1摩爾/升，吸收池厚為1厘米，以一定波長(cháng)原光通過(guò)時(shí)，所 引起的吸光值A)，b—吸收介質(zhì)的厚度(厘米)，c—吸光物質(zhì)的 濃度(摩爾/升)。
物質(zhì)的顏色和它的電子結構有密切的關(guān)系，當輻射(光子)引起電子躍遷使分子(或離子)從基 態(tài)上升到激發(fā)態(tài)時(shí)，分子(或離子)就會(huì )在可見(jiàn)區或紫外呈現吸光，顏色的發(fā)生或變化是和分 子的正常電子結構的變形的。當分子中含有一個(gè)或更多的生色基因(即具有不飽和鍵的 原子基團)，輻射就會(huì )引起分子中電子能量的改變。常見(jiàn)的生色團有：
CO， -N=N-， -N=O，-C N，CS
如果兩個(gè)生色團之間隔一個(gè)碳原子，則形成共軛基團，會(huì )使吸收帶移向較長(cháng)的波長(cháng)處(即紅 移)，且吸收帶的強度顯著(zhù)增加。當分子中含有助色基團(有未共用電子對的基團)時(shí)，也會(huì ) 產(chǎn)生紅移效應。常見(jiàn)的助色基團有：-OH -NH2， -SH， -Cl, -Br, -I
