紫外分光光度計的入門(mén)知識講解
發(fā)布日期：2017-03-23 瀏覽次數：1534
紫外分光光度計采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源，光源透過(guò)測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。分光光度計已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。
分光光度計要測量的樣品必須是均一的溶液，不能有沉淀，如果有沉淀的話(huà)就要搖勻。而分光光度法則是通過(guò)測定被測物質(zhì)在特定波長(cháng)處或一定波長(cháng)范圍內光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。
常用的波長(cháng)范圍為：200～400nm的紫外光區；400～760nm的可見(jiàn)光區；2.5～25μm的紅外光區。
所用儀器為紫外分光光度計、可見(jiàn)光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定，定期進(jìn)行校正檢定。
單色光輻射穿過(guò)被測物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(cháng)度）成正比，其關(guān)系如下式：1 A=log—=ECL T；式中A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數，采用的表示方法是(E1％1cm),即吸收度換算成溶液濃度為1％(g/ml)，液層厚度為1cm的數值；C為100ml溶液中所含被測物質(zhì)的重量，g(按干燥品或無(wú)水物計算）；L為液層厚度，cm。
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長(cháng)，以及相應的吸收系數是該物質(zhì)的物理常數。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后,可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時(shí)應用標準品或對照品同時(shí)操作。
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